БАКТЕРИОФАГОВ ТИТРОВАНИЕ

определение числа фаговых частиц или активности суспензии, содержащей фаг. Б.т. обычно проводят по методу агаровых слоев (А.Грациа, 1936). Принцип метода состоит в том, что при оптимальном соотношении каждая фаговая частица, размножаясь на бактериях, дает потомство, к-рое лизирует все бактерии, находящиеся на определенном участке плотной среды; указанный процесс проявляется в образовании негативных колоний. Количество колониеобразующих единиц (КОЕ) фага в 1 мл суспензии называют титром фага. Для установления титра фага накануне заготовляют бактериол. чашки с 1,5-1,6% прозрачным МПА, пробирки с 2- 2,5 мл мягкого (0,7%) питательного агара, засевают индикаторный штамм бактерий в МПБ. Перед опытом бульонную к-ру бактерий доводят до плотности 5x10⁸ клеток/мл, а из иссл. фаговой суспензии готовят 10-кратные разведения (10^-1 -10^-6) на МПБ или буферном р-ре. Затем расплавляют мягкий агар, охлаждают его до 48°С, вносят в него 0,1 мл бульонной к-ры бактерий и 1 мл одного из разведении иссл. фага. Содержимое пробирки перемешивают и немедля выливают на поверхность 1,5% агара, осторожным покачиванием чашки Петри равномерно распределяют мягкий агар по поверхности плотного. Так поступают с несколькими разведениями. Количество разведении зависит от предполагаемой концентрации фаговых частиц в иссл. суспензии. Чашки инкубируют в термостате при 37°С в течение 16-18 ч, после чего подсчитывают число колоний в тех чашках, где их количество находится в пределах 50 - 250. Число колоний умножают на фактор разведения и получают титр фага. Для большей объективности результатов каждое разведение фага засевают на 2 чашки. Толщина агаровых слоев, концентрация в них агара, плотность индикаторной к-ры, условия и время инкубации могут различаться для разных систем бактерия -фаг. Второй метод Б.т (Р. Аппельмана) состоит в выявлении максимального разведения фаговой суспензии (титра), к-рое дает просветление (лизис) стандартного количества индикаторной к-ры бактерий. Для этого в 10-кратные разведения иссл фаговой суспензии вносят одинаковые количества бактерий (около 250 млн/мл среды). Инкубируют в термостате 16-18 ч и определяют максимальное разведение, в к-ром имеется просветление Титр выражают степенью разведения, напр. 10^-8.